Guia do usuário para semear células em um frasco de cultura de células de 5 camadas
1. Suspensão da célula de preparação da concentração necessária, depois mistura com médio porte em um recipiente. Um volume de 30-50 ml por camada é recompensado.
2.SlowlyAdd a solução mista em relação ao balão de cultura de células de 5 camadas com uma pipeta sorológica. Para evitar orbubbles de espuma, é recomendável definir firmemente a pipeta contra a parede, permitir que a transmissão flua ao longo da ladeira e economize um pouco de líquido na pipeta a cada vez.
NOTAS: A WHILEA 10MLPIPETTE CANDISPERETE MEDIELTA A MEDIDA O MEDIENTE, A 25ML PIPETTE SOMENTE ACONTECE A RECEBILIDADE DE NEST para dispersar o meio.
3. Posição O frasco de várias camadas de várias camadas na vertical com o ninho de marcar, incline-o 45 ° no sentido horário e deixe ficar nessa posição por um tempo para nivelar a thelíquida em cada camada.
4. Coloque -o na bancada de trabalho com o Nest Markfacing para cima.
5. Shake de forma central ItfromsidEtoside para distribuir células uniformemente nas superfícies da cultura.
NOTAS: Tenha cuidado com as bolhas de fooms toavóide e derramando líquido de cada camada.
6. Transferido o frasco para a incubadora para incubação
Média de cultura
1.Aspiração
Inclua o frasco 45 ° no sentido horário com a marca de ninho voltada para você. Em termos de bloqueio, para um ângulo de 45 ° enquanto inverte o multiformal em sua direção. Aproveite a pipeta sorológica na parte inferior da aspiração totalmente.
2.Pouring
Inclua o Flask45 ° no sentido anti -horário com o ninho markfacing você, despeje o Media gasto do balão.
Dicas: Anest 10 ml de pipeta sorológica sugerida para aspiração totalmente.
CellHarvesting
1.Rente fora do tampão de soro residual, adicione a solução de digestão (≥5 ml por camada) e misture uniformemente. Em seguida, siga as etapas 3-4 para distribuir para a dissociação do reagente para cada camada.
2. Let Stand por 2 min e, em seguida, neutralize e misture com a solução inativadora seguindo as etapas 3-4. Agite delicadamente para desalojar as células completamente.
3.Transfere a solução em um tubo de centrífuga ou outros recipientes por aspiração ou vazamento.
4.Rente o balão com tampão por três vezes e transfira o buffer para o tubo de centrífuga para passagem e contagem.
Dicas: Pesquise o vídeo "Flask de várias camadas de ninho" no YouTube (@NestWuxi4075).
